产品货号：
SNM097
中文名称：
γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶测定试剂盒(微量定磷法)
英文名称：
Gamma-glutamylcysteine synthetase
产品规格：
100管/48样
发货周期：
1～3天
产品价格：
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谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-glutamylcysteine synthetase，γ-GCS)，是谷胱甘肽(GSH)合成过程中的限速酶。细胞内γ-GCS活性升高使GSH合成加速，从而提高细胞内外GSH的浓度。GSH是机体一种重要的抗氧化剂，在保持气道上皮细胞完整性、抵御肺部损伤与炎症和抗氧化损伤等方面起到重要的作用，肺脏具有较高浓度的γ-GCS酶活及GSH浓度(6.1～17.5nmol/mg肺组织)，呼吸道上皮内衬液中GSH的浓度(200～400μmol/L)是血浆中的100倍。所以GSH在呼吸道炎症及过敏反应中起了非常重要的作用，并且对心血管疾病及肿瘤的治疗、予后有很大研究价值。
谷氨酸和半胱氨酸在γ-GCS催化作用下，消耗ATP，反应生成γ-谷氨酰半胱氨酸、无机磷和ADP，在636nm下，通过显色反应测定体系中无机磷的量可判断γ-GCS活力的高低。
- 快速简便：全程约2小时，可测50例左右样本。
- 稳定性好：试剂盒2～8℃存放6个月有效。
- 再现性好：变异系数CV=1.7%。
- 回收试验：X =103%。
- 受外界影响因素小：干扰因素少，重复性强。
- 测试面广：可测动物血清（浆）、组织等。
| 组分 | 规格 | 保存 | |
| 试剂一：缓冲液 | 25mL | 4℃ | |
| 试剂二：基质液 | 25mL | 4℃ | |
| 试剂三：促进剂 | 粉剂 | 3支 | 4℃ |
| 溶剂 | 10mL | 4℃ | |
| 试剂四：终止剂 | 6mL | 室温 | |
| 试剂五：显色剂 | 甲液 | 8×7mL | 4℃ |
| 乙液 | 8×6mL | 4℃ | |
| 试剂六：稳定剂 | 100mL | 室温 | |
| 10μmol/mL标准磷储备液 | 5mL | 4℃避光 | |
- 促进剂工作液：
临用前每支试剂三粉剂加试剂三溶剂1.8mL溶解。 - 显色剂工作液：
用时取一瓶试剂五甲液加入一瓶试剂五乙液中，充分混匀，足够13个管子的用量，如果样本量较少，可以按试剂五甲液:试剂五乙液＝7:6的比例配制。显色剂工作液4℃可保存五天，注意避免磷污染。 - 基质缓冲液：
按试剂一:试剂二＝1:1的比例配制，现配现用，配制完成后1～2小时内稳定。 - 0.1μmol/mL标准磷工作液：
用时将10μmol/mL标准磷储备液用双蒸水100倍稀释，例如取0.1mL的10μmol/mL标准磷储备液加入双蒸水至10mL。 - 0.02μmol/mL标准磷工作液：
用时将0.1μmol/mL标准磷工作液用双蒸水5倍稀释，例如取1mL的0.1μmol/mL标准磷工作液加入双蒸水4mL。
| 成分 | 空白管 | 标准管 | 测定管 | 对照管 |
| 基质缓冲液(μL) | 250 | 250 | ||
| 促进剂工作液(μL) | 25 | 25 | ||
| 样本(μL) | 25 | |||
| 37℃水浴1个小时 | ||||
| 终止剂(μL) | 25 | 25 | ||
| 样本(μL) | 25 | |||
| 双蒸水(μL) | 325 | |||
| 0.02μmol/mL标准磷工作液(μL) | 325 | |||
| 显色剂工作液(mL) | 1 | 1 | 1 | 1 |
| 充分混匀，室温静置2分钟 | ||||
| 稳定剂(mL) | 1 | 1 | 1 | 1 |
| 充分混匀，室温静置5分钟后，636nm，1cm光径双蒸水调零比色。 | ||||
- 单位定义
把每小时每毫克组织蛋白的组织中ATP酶分解ATP产生1μmol无机磷所需的酶量定义为一个ATP酶活力单位。即微摩尔磷/毫克蛋白/小时(μmolPi/mgprot/hour)。 - 计算公式
γ-GCS活力
(U/mgprot)＝ OD测定－OD对照 × 标准品浓度
(0.02μmol/mL)× 60分钟 ×13÷ 待测样本蛋白浓度
(mgprot/mL)OD标准－OD空白 6分钟 - 计算举例
取新鲜小鼠小肠组织用生理盐水按重量(g):体积(mL)＝1:9的比例，制备成10%匀浆，离心取上清稀释成1%的浓度，按步骤操作检测，测得空白OD值为0.045，标准OD值为0264，测定OD值为0.801，对照OD值为0.423，同时测得1%匀浆蛋白含量为0.503g/L，则计算结果为γ-GCS活力
(U/mgprot)＝ 0.801－0.423 ×0.02×10×13÷0.503＝8.92U/mgprot 0.264－0.045
附录：磷标准曲线的制备
- 试剂准备
将10μmol/mL标准磷储备液用双蒸水稀释成梯度浓度磷标准液：0.005、0.01、0.02、0.04、0.05、0.06、0.08、0.1μmol/mL。 - 操作表：
成分 空白管 标准管 双蒸水 325μL 梯度浓度磷标准液 各325μL 显色剂工作 1mL 1mL 充分混匀，室温静置2分钟 稳定剂 1mL 1mL 充分混匀，室温静置5分钟后，636nm，1cm光径双蒸水调零比色。 - 测定结果
磷标准液浓度(μmol/mL) 测定OD值 绝对OD值 0.000 0.050 0.000 0.005 0.093 0.043 0.010 0.152 0.102 0.020 0.270 0.220 0.040 0.499 0.449 0.050 0.624 0.574 0.060 0.741 0.691 0.080 0.964 0.914 0.100 1.201 1.151 - 绘制标准曲线
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